稳定细胞株构建
应用构建原理操作步骤 专题
中文名称 | 稳定细胞株构建 |
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中文同义词 | 稳定细胞株构建 |
英文名称 | Stable cell line construction |
英文同义词 | |
CAS号 | |
分子式 | |
分子量 | 0 |
EINECS号 | |
相关类别 | |
Mol文件 | Mol File |
结构式 |
稳定细胞株构建 性质
稳定细胞株构建 用途与合成方法
应用
稳定细胞株构建适用于各种研究应用,如重组蛋白和抗体生产、基因编辑、功能性研究等。
构建原理
构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin),常用G418来代替新霉素进行选择性筛选,筛选得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。
操作步骤
1.载体构建(表达质粒载体、病毒载体);
2.转染/感染;
3.目的蛋白初步检测;
4.抗生素筛选;
5.目的蛋白再次检测(定性/半定量);
6.单克隆细胞株稳定性检测。