STABLE 感受态细胞
概述特点储存条件质粒转化步骤菌株抗性 专题
| 中文名称 | STABLE 感受态细胞 |
|---|---|
| 中文同义词 | STABLE 感受态细胞 |
| 英文名称 | Stable Competent Cell |
| 英文同义词 | Stable Competent Cell |
| CAS号 | |
| 分子式 | |
| 分子量 | 0 |
| EINECS号 | |
| 相关类别 | 感受态细胞;细胞 |
| Mol文件 | Mol File |
| 结构式 |
STABLE 感受态细胞 性质
STABLE 感受态细胞 用途与合成方法
概述
STABLE感受态细胞是采用大肠杆菌Stable菌株经特殊工艺处理得到的感受态高转化效率菌株，是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株。
特点
Stable菌株是是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株，具有与Stbl2，Stbl3完全不同的基因型，但是表现出比Stbl2，Stbl3更优异的性能，特别适合慢病毒或具有末端重复序列DNA片段的克隆。2.含有recA1 rel A1突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率。3.含有核酸酶endA1突变，避免提取质粒过程中核酸酶的污染，提高了提取病毒质粒的产量和质量。4.含有lacZΔM15，可用于蓝、白斑筛选。
储存条件
-70℃保存，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。
质粒转化步骤
1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入1-5μl含有1-100ng的质粒DNA或5-10μl连接产物到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀。2.冰水浴中放置30分钟，不要晃动。3.42℃热击60秒钟，不要晃动。4.冰水浴中放置2分钟，不要晃动。5.加入500μl的室温的SOC或LB培养基。6.置于37℃摇床中，150-200rpm震荡复苏培养60分钟。7.取50-100μl菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养12-18小时。（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm离心30秒钟，弃掉上清，留100μl左右的液体，用200μl吸头轻轻吹打散菌块，取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化，连接产物转化最好用涂布法。）（质粒快速转化步骤：将步骤2的时间缩短到5分钟，对于氨苄青霉素抗性的质粒，步骤4完成后，可直接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的LB平板上。其它抗性的质粒仍需60分钟的复苏培养。）
菌株抗性
对氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素和呋喃妥因敏感。具有四环素和链霉素抗性。
