• 英文名称 : Sepharose 4FF

• 储存条件 : 4-8℃

• 外观（性状） : 颗粒

• 单位 : 瓶

产品简介：

琼脂糖凝胶4FF是在琼脂糖凝胶4B的基础上经过两次交联形成的高交联基质，微球的化学稳定性及物理性能显著增强，刚性增加，流速更快，使产品处理时间大大缩短。可用于生物大分子的凝胶层析。

1. 外观

本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

2. 理化指标

*检测条件： 层析柱10mm×300mm  *柱床高15cm,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl

3. 贮存

产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。

4. 注意事项

本品应避免与氧化剂接触，避免长时间暴露在空气中。运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

5. 应用

本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，可用有机溶剂及1~2mol/L 的NaOH在位清洗，适用于工业规模生产，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。

5.1 装柱

凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。

（1）让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。

（2）选择一根一定直径的柱子，长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶（约为柱床体积的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。

（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。

（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用缓冲液平衡柱子，到柱床稳定。

（6）最好用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平，上好柱头。

5.2 平衡

让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。

5.3 上样

（1）样品用缓冲液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理，再上样。

（2）介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的，分子量大的先流出来。

（3）上样体积约为柱体积的1~2%，越小分离越好。

5.4 洗脱

用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。

5.5 再生

一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。

5.6 注意

在装柱、使用和保存柱子的时候，始终要避免柱子流干气泡进入。若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

5.7 在位清洗

（1）对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M NaCl去除。

（2）对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH 去除。

（3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。

清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。

5.8 注意

在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干气泡进入。

5.9 去热源

用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除：

（1）2倍柱体积的70%乙醇；

（2）2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5；

（3）1倍柱体积4M尿素；

（4）3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl；

以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

5.10 消毒

用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

注意：上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。

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