阪崎肠杆菌显色培养基

　　(Chromogenic Enterbacter Sakazakii Agar)

　　用 途：

　　阪崎肠杆菌显色培养基供婴儿奶粉以及其它食品中阪崎肠杆菌的鉴定和计数。(GB4789.40-2010和SN/T 1632-2005，ISO标准)

　　原 理：

　　蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;胆盐抑制革兰氏阳性菌，氯化钠可维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生;显色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-ɑ-D 葡萄糖苷与阪崎肠杆菌中的α-葡萄糖苷酶发生反应，水解底物，释放出5-溴-4-氯-3-吲哚基显色基团，在淡黄色平板上产生绿-蓝绿色的菌落。

　　阪崎肠杆菌显色培养基配方(每升)：

　　蛋白胨 11g

　　牛肉膏粉 5g

　　氯化钠 5g

　　柠檬酸铁铵 　 1g

　　硫代硫酸钠 1g

　　胆盐 1.5g

　　5-溴-4-氯-3-吲哚-ɑ-D 葡萄糖苷 0.1g

　　琼脂 15g

　　最终pH 7.3±0.2

　　使用方法:

　　1. 取瓶内阪崎肠杆菌显色培养基干粉39.6克，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min;冷却至50℃，摇匀倒平板。在室温可保存一天或在冰箱里贮存数天(避光，4℃)。

　　2. 取样品333克按MPN三管法分别取100克、10克和1克分装在各三个2000ml、250ml和100ml的三角瓶中，在三角瓶中已装有经45℃预热的9/10(样品为1/10)的无菌蒸馏水或缓冲蛋白胨水，摇匀，在36℃培养18-22小时(SN和FDA方法)。

　　3. 各取10ml上述悬浮液加到装有90mlEE肉汤(022160)/mLST-Vm(022212)的150mL的三角瓶中，在36℃/44℃增菌培养18-22小时。

　　4. 用划线或涂布法把混匀的肉汤接种到阪崎肠杆菌显色琼脂平板上，35-37℃培养18-24小时。

　　5. 可使用MicrogenTMGN-ID或API20E或生化管试验，对疑似阪崎肠杆菌菌落进行生化鉴定。

　　阪崎肠杆菌显色培养基质量控制：

　　本品倾注平皿后呈淡黄色，下列菌株接种后36±1℃培养18-24小时生长情况如下表:

　　贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期二年。

　　规 格：可配置1L的培养基干粉。

　　参考文献：

　　1.GB/T4789.40-2008 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 阪崎肠杆菌检验

　　2.GB 4789.40-2010 中华人民共和国国家标准 食品安全国家标准 食品卫生微生物学检验 阪崎肠杆菌检验

　　3.SN/T 1632.1-2005 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法 第1部分 分离与计数方法

　　4. SN/T 1632.2-2005 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法 第2部分 PCR方法

　　5.ISO22964-2006 Milk  milk products-Detection of Enterobacter sakazakii