特性

 提供可在哺乳动物和细菌中表达的载体  

 提供定位于细胞表面和内部的对照质粒  

用 pSNAP_f-tag 和 pCLIP_f-tag 的载体构建的pSNAP_f-tubulin 和 pCLIP_f-H2B 质粒转染活的HeLa 细胞。用 3 μM SNAP-Cell TMR-Star（红色）和 5 μM CLIP-Cell 505（绿色）标记细胞25 分钟，细胞核经 Hoechst 33342（蓝色）复染。  

推荐测序引物 (NEB 不提供) 如下：    

SNAP/CLIP 正向引物 (20-mer)

5´d(ATCCCCTGCCACCGGGTGGT)3´

SNAP/CLIP 反向引物 (18-mer)

5´d(CTGGGGCAGGCACTTCCA)3´

SNAP/CLIP CMV 正向引物 (18-mer)

5´d(GACGCAAATGGGCGGTAG)3´

TR 1 反向引物 (19-mer)

5´d(GCTGCGCAACTGTTGGGAA)3´

SNAP/CLIP ST 1 反向引物 (20-mer)

5´d(AGGGAGTACTCACCCCAACA)3´

T7 通用引物

5´d(TAATACGACTCACTATAGGG)3´

T7 末端反向引物

5´d(TATGCTAGTTATTGCTCAG)3´

概述

NEB 提供几种表达载体，该载体能表达携带有 SNAPtag 和 CLIP-tag 的融合蛋白，适用于在哺乳动物及细菌中标记，相应的启动试剂盒也包含有相应的载体。哺乳动物 SNAP   _f 和 CLIP   _f 载体表达 SNAP- 和 CLIP-tags的速度较之前的载体更快。表达载体中，tag 的上、下游具有改造后的多克隆位点，使得 tag 可以表达在目的蛋白的任何一端，该表达过程受 CMV 启动子调控。SNAP   _f-tag 和 CLIP   _f-tag 表达载体中携带新霉素抗性基因（NeoR），可用于筛选稳定转染子。载体上还带有一个 IRES 元件，有助于融合蛋白和 NeoR 的高效表达。为在哺乳动物细胞中高效表达，Tag 基因中的密码子已经过优化。NEB 还提供对照质粒，这些质粒编码的融合蛋白分别定位于细胞核（H2B）、线粒体（Cox8A）和细胞表面（ADRβ2，NK1R）, 相应的启动试剂盒中包含相应的对照质粒（见 264 页）。

细菌表达载体 pSNAP-tag (T7)-2 包括位于 SNAP-tag上、下游的克隆位点，受 T7 启动子调控。为在    E. coli中高效表达，SNAP-tag 基因中的密码子已经过优化。

来源

通过标准的质粒纯化程序，分离自 E. coli 菌株。质粒已去除内毒素，可用于高效转染。

浓度

500 μg/ml。

限制图谱

pSNAP_f 载体的详细描述和限制图谱请见354 页。查看所有表达载体和对照质粒的序列和图谱文件，请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。