点击查看资料

中文名:酵母平板菌落快速转化试剂盒（一步法）

英文名:Yeast Transformation Kit

CAS:N/A

级别:N/A

分子量:N/A

分子式:N/A

纯度:N/A

储存条件:2-8℃

产品简介

储存条件： -20 ℃储存，未开封有效期24个月。

产品内容：

产品介绍：

  酵母菌落快速转化试剂盒是以未经冻存的酿酒酵母平板菌落（无需摇菌）或者菌液作为菌体来源（短期4 ℃保存的平板或者菌液亦可使用），无需制备感受态细胞，无需分步热激，一步转化，整个操作流程在90 min内完成。省去了通过两次培养获得状态良好的菌体的过程，以及制备感受态的过程，节省了1-2天的菌种培养转化时间，或者购买感受态的经费。其转化率可达经典酵酿酒母转化方法（SK2400）的50-80%（常规酵母杂交菌种检测）。转化效率可满足除文库传化之外的其它转化实验。

菌落转化步骤：

1.在无菌的1.5 mL的离心管中加入100 μL的P1溶液（转化液）。

2.在上述转化液中加入1 μg的质粒DNA。共转加入每种质粒各1 μg。

3.挑取2-3个较大酵母菌落加入上述转化液中，震荡混匀。

4.置于42 ℃水浴60 min（每隔20 min 颠倒混匀一次，避免酵母菌沉底）。

5.可选步骤：3,000 rpm离心3 min，弃上清。用400 μL YPD Plus Liquid Medium（YT0004）重悬，30 ℃摇床震荡培养30-60 min。YPD Plus用于转化后复苏酵母菌，转化效率可以提高50-100%。

6.3,000 rpm离心3 min。加入100 μL无菌水重悬菌体。

7.将重悬菌体全部涂布于相应的缺陷型培养基平板上。

8.30 ℃恒温培养3-5天，直至平板长出菌落。

菌液转化步骤：

  收集1.5-3 mL酵母菌液沉淀后，加入100 μL P1溶液（转化液）和1 μg质粒DNA后震荡混匀。后续步骤和平板菌落转化步骤4-8相同。

注意事项：

1. 转化全程要求无菌操作。

2. 为了保证转化效率，感受态不宜直接用液氮冻存。

3. 增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。

发表文章：

Liu, Baoling, et al. "Stearoyl-ACP Δ9 Desaturase 6 and 8 (GhA-SAD6 and GhD-SAD8) Are Responsible for Biosynthesis of Palmitoleic Acid Specifically in Developing Endosperm of Upland Cotton Seeds." Frontiers in plant science 10 (2019): 703.（IF=4.106）

https://doi.org/10.3389/fpls.2019.00703