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中文名:Carrier DNA/鲑鱼精DNA （10mg/ml，用于酵母转化）

英文名:Carrier DNA

CAS:N/A

级别:N/A

分子量:N/A

分子式:N/A

纯度:N/A

储存条件:-20°C

产品简介

Carrier DNA (鲑鱼精DNA) 为短的线形单链DNA，可包裹质粒DNA，在酵母细胞摄取外源质粒DNA过程中发挥作用，促进质粒进入酵母细胞，另外还可保护质粒免于被DNA酶降解。在每次使用前务必进行两次热变性，保证Carrier DNA在转化实验体系中以单链形式存在。

初次使用Carrier DNA，请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。下次使用时请在冰上解冻Carrier DNA。

酵母感受态细胞的制备：

1.活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基（YPDA加20g Agar/L）上划线，在30℃培养2-4天。

2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的短线，在30 ℃培养2-4天。待酵母单菌落长至2 mm长时，接种。

3.首先把酵母细胞接种到3 ml液体YPDA培养基中，30℃过夜培养。

4.第二天转接到含有30 ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600到0.4-0.5范围内。收集细胞，1000 g，离心5 min, 去上清。

5.沉淀用30-50 ml的无菌的去离子水悬浮。1000 g，离心5 min，去上清。

6.沉淀用合适体积的100 mM LiAc悬浮（30 ml的酵母菌最多用不超过1 ml的100 mM LiAc悬浮，通常100 μl的酵母细胞用于转化一个质粒，即一个反应）。

7.把酵母细胞的悬浮液分装到1.5 ml的离心管中，每管分装100 μl，用于转化一个质粒即一个反应。1000 g，离心5 min，去上清。制备好的感受态细胞备用。

酵母转化：

1.配制预混液，每转化一个质粒即一个反应需要360 μl的预混液。

2.吸取360 μl的预混液加入到感受态细胞中，用枪头反复吹吸沉淀，使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有PEG的预混液中。

3.放置在30 ℃的水浴锅中孵育30 min，每10 min混匀一次。

4.放置在42 ℃的水浴锅中热击30 min，每10 min混匀一次。

5.12000 rpm，离心1 min，去掉上清液。

6.沉淀中加入100 μl的无菌的去离子水，悬浮沉淀。

7.把酵母细胞涂到相应的酵母培养基平板上，30℃培养2-4天。

注意事项：

1. 初次使用Carrier DNA，请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。下次使用时请在冰上解冻Carrier DNA。

2. PEG溶液在低温环境下会析出，请于常温环境下完全溶解后使用。

3. 转化全程要无菌操作。