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中文名:酵母阳性克隆快速检测试剂盒（筛库）

英文名:Quick Yeast positive clone assay kit

CAS:N/A

级别:N/A

分子量:N/A

分子式:N/A

纯度:N/A

储存条件:2-8℃

产品简介

保存条件：-20 ℃储存，未开封有效期24个月。

包装内容：

产品说明：

  本产品用于酵母单杂双杂筛库系统，可以快速地扩增、分选并分析文库筛选所获得的阳性克隆中prey/文库质粒的cDNA插入片段。

  PCR Mix含Taq、dNTP、PCR buffer和水，只需要补充模板5 μL，引物混合物1 μL即可用于PCR扩增。可供50 μL PCR体系进行200次扩增实验。3AD & 5AD引物混合物可用于pGADT7、pGADT7-Rec、pGADT7-Rec2系列载体构建的AD文库。每50 μL体系加入1 μL引物混合物。亦可根据需要加入自备引物。本试剂盒除提供菌落裂解液I用于平板菌落PCR外（可供200 T），还免费提供菌液裂解液II用于菌液PCR（可供20 T）。

使用方法：

菌落样品

1.准备PCR预混液：根据检测克隆数，等比例扩大配制体积。

2.吸取5 μL菌落裂解液I加入PCR管中（如处理样品量大，建议用8联排PCR管）。

3.用无菌牙签或者枪头刮取适量直径1-2 mm的酵母菌落悬浮在菌落裂解液I中。

4.吹打或者震荡混匀后，静置5 min，即为裂解产物。

5.（可选步骤）于-20 ℃冷冻5 min或置于-80 ℃冰箱速冻10 s。

6.在裂解产物中加入45 μL PCR预混液（已加引物），直接PCR扩增。

注意：

1. 先取3-5个克隆进行预实验后再进行批量实验。

2. 培养时间短的样品，无需冷冻。冷冻完的样品可直接加入PCR预混液，解冻与否均可。

3. 团状酵母菌落很难裂解，吹打或者震荡混匀尤为重要。

4. 如预实验失败，将上述第4步得到的裂解产物置于PCR仪98 ℃保温5 min后，用掌上离心机（8联排），离心1min 后取上清加入45 μL PCR预混液中，可有效提高PCR效率。

菌液样品

1. 吸取5-10 μL菌液裂解液II加入PCR管中（如处理样品量大，建议用8联排PCR管）。

2. 再加入等体积的酵母菌液，震荡混匀。

3. 于-20 ℃冷冻3 min或置于-80 ℃冰箱速冻10 s后，PCR仪95 ℃保温2 min。

4. 12,000 rmp离心2 min，取裂解产物（上清），用于PCR扩增。

PCR反应体系:

PCR反应条件：

注意事项：

1. 菌落PCR前，先刮取部分菌落保存，可以有效避免样品污染和丢失。

2. 新鲜菌落的PCR成功率接近100%。如生长期较长的菌落，请先进行预实验。

3. 如部分样品经过多次PCR都无法检测成功。建议小摇之后，用快速酵母质粒提取试剂盒（PE052）提取（约需30 min），再进行PCR扩增。

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