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中文名:Hoechst33342/PI细胞凋亡染色试剂盒

英文名:Hoechst33342/PI Apoptotic Staining Kit

CAS:N/A

级别:N/A

分子量:N/A

分子式:N/A

纯度:N/A

储存条件:2-8℃

产品简介

产品内容：

产品简介：

  Hoechst 33342/PI双染试剂盒（Hoechst 33342/PI Double Stain Kit）采用Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）双染的方法以区分凋亡细胞和坏死细胞的试剂盒。

  其检测原理是：细胞核荧光染料Hoechst 33342可以穿透细胞膜，嵌入双链DNA后释放蓝色荧光。对于正常细胞，其可少许进入细胞膜使其染上低蓝色。而凋亡细胞由于细胞膜通透性增强，从而使得进入凋亡细胞内的Hoechst 33342明显多于正常细胞，荧光强度比正常细胞要高。另外，细胞发生凋亡时染色质会固缩，从而使得染料能更有效和聚集的结合于DNA，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受损而不能有效的将Hoechst 33342排除到细胞外使其在细胞内的积累增加，这些特征都使得凋亡细胞经染色后荧光会比正常细胞明显增强。但细胞核荧光染料PI不能穿透细胞膜完整的正常细胞或凋亡细胞，即活细胞对PI染料拒染。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性在早期即已丧失，可被PI染色。

操作步骤：

一步法染色

1. 每个样品收集约10-100万细胞于1.5 mL离心管内，离心弃上清。细胞沉淀用0.8~1 mL细胞染色缓冲液重悬。 

2. 加入5 μL Hoechst 33342染色液。

3. 加入15 μL PI染色液。

4. 混匀，冰浴或4 ℃孵育20~30 min。 

5. 观察与分析。

两步法染色

1. 每个样品收集约10-100万细胞于1.5 mL离心管内，离心弃上清。细胞沉淀用0.8~1 mL细胞染色缓冲液重悬。 

2. 加入5 μL Hoechst 33342染色液，置于37 ℃孵育5~15 min。

3. 置于冰水浴中冷却后，4 ℃ 1000g离心3~5 min，吸除上层染色液。

4. 加入0.8~1 mL细胞染色缓冲液重悬细胞沉淀。

5. 加入15µL PI染色液，置于冰浴或4 ℃，孵育5~15 min。

6. 观察与分析。

注意：对于贴壁细胞可以胰酶消化，PBS洗涤后收集细胞沉淀后再进行染色。

染色结果观察 

1. 荧光显微镜观察：

  如果使用荧光显微镜检测，检测前离心沉淀细胞，用PBS洗涤一次，再涂片观察红色荧光和蓝色荧光。对于贴壁细胞使用荧光显微镜检测，可以不收集细胞，弃培养液，之后用PBS洗涤细胞一次，弃PBS洗涤液。然后直接依次按照上述比例加入细胞染色缓冲液、Hoechst 33342染色液和PI染色液冰浴或4 ℃染色20-30 min。染色后PBS洗涤一次，然后在荧光显微镜下观察。

2. 流式细胞仪分析：

  用流式细胞仪在激发波长400～500nm检测蓝色荧光，在大于630nm处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。流式细胞仪的散点图上，可分为三群细胞，分别表现为：正常细胞为低蓝色/低红色（Hoechst33342+/PI+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（Hoechst33342++/PI+），坏死细胞为低蓝色/高红色（Hoechst33342+/PI++）。