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保存条件：    
   

-20ºC避光保存，至少一年有效。检测缓冲液和检测底物混合后配制成的One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂，-80ºC避光保存，至少一年有效；-20ºC避光保存，推荐3-6个月内使用。

注意事项：    
   

对于订购后可能放置较长时间后再使用的，或者对于检测结果的精度要求特别高的，推荐订购One-Lumi™ II；对于订购后短期内使用完毕的，推荐订购使用更加便捷的One-Lumi™。

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前细胞和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将检测缓冲液在室温或不超过25ºC的水浴中融解并混匀后再与检测底物混合成检测试剂使用。

尽管经测试检测缓冲液和检测底物混合后配制成的One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，为保证检测试剂的稳定性、取得良好的使用效果，建议现用现配。没有用完的检测试剂可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。反复冻融过程中，可能会导致检测试剂中出现少量沉淀，此时宜平衡至室温，并尽量溶解。如仍有残留的不溶物，可以离心去除后使用，经测试不会影响后续的检测效果。

请使用适合于细胞培养的白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。

待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰萤光素酶反应，从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。经测试，最终反应体系中DMSO含量在2%以内不会对反应产生影响。

为避免细胞转染效率的差异而带来的误差，如果有必要，可以同时转染海肾萤光素酶(Renilla luciferase)的报告基因质粒作为内参，采用碧云天的Dual-Lumi™/Dual-Lumi™ II双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG088S/RG088M/RG089S/RG089M)进行检测。

如果希望先裂解并收集细胞样品，然后再使用本试剂盒进行检测，须单独采购RG126S/M萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液。其它裂解液未经测试。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：    
    1.细胞的准备：    
使用适合进行化学发光检测的96孔板，每孔接种100μl细胞(如使用384孔板，每孔接种25μl细胞，具体用量视不同类型的384孔板而定)，同时设置不含细胞的培养液孔作为阴性对照，按照细胞培养和细胞转染的常规方法培养和转染细胞。如有需要，可加入药物处理细胞。    
    2.检测试剂的准备：    
融解冻存的One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测缓冲液，将检测缓冲液全部转移至检测底物瓶中，旋紧瓶盖后适当颠倒混匀，当检测底物全部溶解并混匀后即为One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂。按照96孔板每孔100μl (384孔板每孔25μl)的量，取适量One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂，平衡至室温。    
注：冻干粉状的One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测底物可能会有少量粘附在瓶盖和瓶口，旋开瓶盖前可以拿起瓶子用瓶底并轻轻敲击桌面，使粉末尽量掉落至瓶底，然后再轻轻旋开瓶盖，并注意不要损失冻干粉。    
    3.萤光素酶检测：    
a.取出细胞培养板在室温平衡10分钟(通常不宜超过30分钟)。    
b.96孔板每孔加入100μl One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂(384孔板每孔25μl)。    
c.室温(约25ºC)孵育5分钟，使发光信号趋于稳定。    
d.使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数，每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间，具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。    
    4.裂解并收集细胞后的检测(本步骤仅当细胞量比较大的情况下，例如细胞培养在培养皿或6孔板中时，可以考虑采用)：    
a.对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的    RG126S/M萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞：离心去上清后，参考下表加入适量萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液。    
   

注：如果萤光素酶的表达水平比较低，可以尝试使用更少的裂解液，例如6孔板的每孔用量可以最小为100μl。    
b.充分裂解后，10,000-15,000g离心3-5分钟，取上清用于测定。    
注：细胞裂解后可立即测定萤光素酶，也可以先冻存，待以后再测定。冻存样品需融解，并达到室温后再进行测定。    
c.取20μl样品，加入100μl已经平衡至室温的One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂，适当混匀。    
d.室温(约25ºC)孵育5分钟，使发光信号趋于稳定。    注意：如果对于数据的稳定性的要求不太高，可以忽略本步骤，在混匀后立即进行化学发光检测。    
e.使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数，每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间，具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。    
    常见问题：    
    1.Luminometer和荧光分光光度计有何不同？    
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光，样品需要由特定波长的激发光激发，然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光，不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能，即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。    
    2.可以进行萤光素酶报告基因检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测？    
是。萤光素酶报告基因的检测原理和本试剂盒的原理相同，可以用相同的仪器测定。