OptiVitro® 293细胞无血清培养基HE01（OptiVitro® 293 Cell Medium SF，OptiVitro® 293-SFM）是一款专为悬浮适应的 HEK 293 衍生细胞（293T、293F等）而设计的无血清、无动物源成分、化学成分明确（Chemical Defined，CD）的培养基，支持悬浮293细胞快速扩增、高密度生长以及转染，可用于病毒包装、蛋白表达等。

使用前准备

需要额外添加终浓度为6mM的谷氨酰胺。由于谷氨酰胺易降解，可每次使用培养基时加入谷氨酰胺，或者分装部分培养基添加谷氨酰胺后一周内使用。

悬浮293细胞的扩增培养

⚫将悬浮293细胞以0.6-1×106 cells/mL的密度接种于125mL摇瓶内，培养体系为20-30mL，摇床设定为37℃、8% CO2，推荐转速为95 rpm（50 mm转径摇床）或125 rpm（19mm转径摇床），传代间隔时间为48-72小时。若复苏初期细胞活率较低，一般传代3次之后可使活率达到90%以上。

注意：

⚫ 如果原悬浮293细胞是用其他品牌培养基培养，可直接用本培养基产品传代培养，传代3次（9-10天）后细胞可适应本培养基产品，细胞活率达到90%以上、扩增速度稳定，可进行后续实验。

⚫ 如果原悬浮293细胞是用其他品牌培养基培养后冻存的，推荐用细胞冻存前使用的培养基来复苏细胞，传一代后换成本培养基产品，再传代3次，细胞活率达到90%以上、扩增速度稳定，可进行后续实验。使用本培养基产品培养后冻存的细胞，则可以使用本培养基产品复苏。

悬浮293细胞的转染

1. 细胞准备：新复苏的细胞至少需要传代4次、且活率达到90%以上再进行转染，转染前根据需要调整细胞密度为2-3×106 cells/mL。

2. 将质粒、转染试剂分别加入无菌PBS（或转染专用稀释液）中稀释，室温静置5分钟。

3. 将转染试剂稀释液缓慢加入到质粒稀释液中，混匀，室温孵育10-20分钟。

4. 将质粒-转染试剂混合物加入悬浮293细胞培养液中，放入培养箱中培养。

5. 转染后无需换液，48-72小时后可进行转染效率检测、收获蛋白或病毒等操作。

注意：

⚫ 本培养基产品支持PEI、脂质体等转染试剂。

⚫ 如细胞密度为2×106 cells/mL，建议添加质粒量为1µg/mL；如细胞密度为3×106 cells/mL，建议添加质粒量为1.5µg/mL。如使用PEI转染试剂，PEI与质粒的质量比例建议为3:1。